镇银膏对体液免疫、细胞免疫和对脾脏T淋巴细胞增殖的影响（山东医科大学）

<>镇银膏药理学报告之五：镇银膏对体液免疫、细胞免疫和对脾脏T淋巴细胞增殖的影响（山东医科大学）

< >摘要  银屑病（牛皮癣）为常见的皮肤病之一；目前尚未有理想的治疗药物。我们曾应用Bonder和Van Scott提出的鼠尾磷片表皮模型Jarrett和Spearman提出的小鼠阴道上皮模型证实，镇银膏对小鼠及大鼠阴道上皮细胞有丝分裂均有明显抑制作用，对小鼠尾磷片颗粒细胞层的形成有明显的促进作用，显示镇银膏对银屑病有治疗作用。为探讨镇银膏抗银屑病的作用机理，我们的试验也证实镇银膏能明显提高小鼠外周血淋巴细胞活性，并可显著增强小鼠NK细胞杀伤靶细胞的活性。说明镇银膏有免疫调节作用。为进一步证明镇银膏的免疫调节作用机理，我们又深入研究了镇银膏对体液免疫、细胞免疫和对脾脏T淋巴细胞增殖的影响，结果证明，镇银膏能显著增强B细胞抗体形成功能，降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，显著提高小鼠脾T淋巴细胞增殖活性。 < >    一、试验目的 < >    在镇银膏药效学实验的基础上，观察镇银膏对动物免疫功能的影响，进一步探讨其作用机理。 < >    二、受试药物 < >   （一）名称   镇银膏 < >   （二）提供单位：山东省淄川第二制药厂亓镇大夫 < >   （三）编号或批号：930918 < >   （四）含量、效价、制剂标示量：0．95g/ml < >   （五）溶剂：芝麻油 三、动物    （一）来源 BALB／C纯种小鼠，山东医科大学实验动物中心提供。    （二）体重18～22g，雌雄各半。    （三）各组动物数：8～10只。     四、实验方法与结果    （一）镇银膏对小鼠脾脏B细胞抗体形成的影响。     1．试验方法：取BALB/C小鼠38只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为4组，每只鼠背部剃毛约3cm2，第1组为空白对照组，于背部剃毛处涂抹芝麻油0.05ml/10g；第2～4组为镇银膏高、中、低剂量组，于背部剃毛处分别涂抹镇银膏0.1、0.05和0.025m1／10g，隔日1次，共7次。实验前4天，给每只小鼠ip 6% SRBC 0.2ml／只致敏，4天后将小鼠脱颈椎处死，取出脾脏，按常规方法制成单个细胞悬液，用Tris—NH4Cl破除红细胞，用含5％小牛血清的Hank`s液调整细胞浓度为2×l07／ml。取1ml细胞悬液及0.2%SRBC，1：10豚鼠血清各lm1，加入试管中，于37℃水浴放置1小时，取出后，以3000rpm×5min离心，取上清液于721分光光度计测定413nm的OD值。    2．给药途径  皮肤    3．给药次数  隔日1次，共7次。    4．试验对照（1）空白对照  芝麻油（2）已知阳性药物对照及选择依据，本试验未设阳性药物对照，因去炎松和氨甲喋呤吟均为已知的免疫抑制剂，且本试验为作用机理的探讨，故未设阳性对照药物。

5．试验结果见表1
< 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>表1：锡银膏对小鼠日细胞抗体形成的影响

< 0cm 0cm 0pt -3.3pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center> < 0cm 0cm 0pt -3.3pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>组别	< 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: center; mso-pagination: widow-orphan" align=center> < 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>动  物  数	< 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: center; mso-pagination: widow-orphan" align=center>OD值 < 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>（x±s）
< 0cm 0cm 0pt -3.3pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>空白对照组 < 0cm 0cm 0pt -3.3pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>镇银膏高剂量组 < 0cm 0cm 0pt -3.3pt; TEXT-ALIGN: center; tab-stops: 210.0pt 393.75pt" align=center>镇银膏中剂量组 镇银膏低剂量组	8 10 10 10	0.7888±0.0276 0.8255±0.0372* 0.8060±0.0232 0.7705±0.0400

                  与空白对照组比较    *p＜0.05

结果表明，与空白对照组比较，高剂量组可显著增强B细胞抗体形成功能，而中、低剂量组无显著差异。

（二）银镇膏对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

    根据王晓京方法，略加改进，取BALB／C小鼠34只，体重18～22g雌雄各半，分组及给药方法同上实验。实验前4天，给小鼠ip5％可溶性淀粉溶液，0．5ml／只，作为巨噬细胞产生的诱导剂。最后1次给药次日脱颈椎处死小鼠，以Hank`s液冲洗腹腔，收集腹腔巨噬细胞，经离心后弃上清液，用1640完全培养液调整细胞浓度为2×10<sup>6</sup>／m1，加入96孔细胞培养板，每孔200μl，每只鼠样本加3个复孔，置37℃5％CO<sub>2</sub>孵箱内孵育4小时，后用Hank`s液冲洗两次，最后用1640完全培养液洗1次，除非粘附细胞，每孔加0.072％中性红生理盐水100μl，37℃5％CO₂孵箱培养15分钟后，甩掉中性红，用Hank`s液洗3次，然后加入醋酸乙醇液200μ1／孔，静置过夜，用酶标仪540nm处测定巨噬细胞溶解后释放出的中性红光密度值，结果见表2。

表2：镇银膏对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

组别	动  物  数	OD值 （x±s）
空白对照组 镇银膏高剂量组 镇银膏中剂量组 镇银膏低剂量组	10     8     8     8	0.618±0.048 0.646±0.076 0.318±0.082** 0.328±0.104**

                  与空白对照组比较  ** p＜0.01

    结果表明，与空白对照组比较镇银膏中、低剂量可显著降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。高剂量组无显著性差异。

（三）镇银膏对ConA诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响                                                                                                                                                                                    
< 0cm 0cm 0pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">    1．试验方法  取BALB/C小鼠24只，体重18一22g，雌雄各半，随机分为4组，每只鼠背部剃毛约3cm²，第1组为空白对照组，于背部剃毛处涂抹0.05m1／10g芝麻油；第2～4组为镇银膏高、中、低剂量组，于背部剃毛处分别涂抹镇银膏0.1、0.05和0.025ml／10g隔日1次，共7次。于最后给药次日将小鼠眼球放血后脱颈椎处死，按常规方法取脾脏，制成单个核细胞悬液，以1640完全培养液（CM）调整细胞浓度为5×10⁶／ml。于96孔细胞培养扳中，每孔加入100μl脾细胞悬液、再加入100μl含ConA的培养液，使ConA的终浓度为3μg／ml。置37℃，5％CO₂孵箱中孵育66小时，终止培养前6小时，加入³H一TdR 15μci／ml，每孔20μl。用多头细胞收集器将细胞收集于69^#玻璃纤维滤纸上，甩冷蒸馏水淋洗12次，晾干，置测量瓶中，加入5ml闪烁液，用液闪计数仪测定每分钟CPm值。

< 0cm 0cm 0pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">    2．给药途径  皮肤

< 0cm 0cm 0pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">    3．给药次数  隔日1次，共7次。

< 0cm 0cm 0pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">    4．试验对照（1）空白对照  芝麻油（2）已知阳性药物对照及选择依据，本试验未设阳性药物对照，理由同前实验。

< 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 21pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">5．试验结果见表

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">                表3：镇银膏对ConA诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖的影响

< 0cm 0cm 0pt -3.3pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">    < 0cm 0cm 0pt -3.3pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt">组别	< 0cm 0cm 0pt; TEXT-ALIGN: left; mso-pagination: widow-orphan" align=left> < 0cm 0cm 0pt; tab-stops: 210.0pt 393.75pt"> 动  物  数	OD值 （x±s）
空白对照组 镇银膏高剂量组 镇银膏中剂量组 镇银膏低剂量组	6     6     6     6	8.40±1.20 23.30±1.9  **△△ 11.00±1.80  * 9.70±1.10

        与空白对照组比*P＜0.05    **P＜0.01      镇银膏高剂量组与中、低剂量组比  △△p＜0.01

    结果表明，镇银膏高、中剂量组均能显著提高小鼠脾胆下淋巴细胞增殖活性（p＜0.01和0.05），而高剂量组的作用与中、低剂量组比有非常显著性差异。

三、结论  

（一）、镇银膏0.1ml/10g，可显著增强B细胞抗体形成功能。

    （二）、镇银膏0.05和0.025m1／10g可降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

（三）、镇银膏0.1和0.05m1／10g可显著提高小鼠脾脏T丁淋巴细胞增殖活性。

"二、受试药物>>

<>   （一）名称   镇银膏

<>   （二）提供单位：山东省淄川第二制药厂亓镇大夫

<>   （三）编号或批号：930918

<>   （四）含量、效价、制剂标示量：0．95g/ml

<>   （五）溶剂：芝麻油"

<>（三）编号或批号：930918 这个是什么批号或编号请具体说明一下?

管理员慧眼，其实我对提供单位：山东省淄川第二制药厂亓镇大夫　也看不太明白，元镇大夫原来不是人啊？