镇银膏对雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响（山东医科大学）

<>镇银膏药理学报告之一：镇银膏对雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响（山东医科大学）

< align=center> < align=center> 摘要  银屑病（牛皮癣）为常见的皮肤病之一，国内外研究较多，但尚未找出理想的治疗药物。迄今为止，银屑病还没有实际应用的动物疾病模型，但已有若干种可用于药物研究的实验动物模型，这些模型模拟了银屑病的主要病理生理特点。Bonder和Van Scott提出的鼠尾鳞片表皮模型，Jarrett上和Spearman提出的小鼠阴道上皮模型，即是这些模型中的二种。 <> <>银屑病表皮的病理生理特点是增生过快和分化不全，雌激素周期的小鼠阴道上皮增生活跃，有丝分裂增多，细胞转换加快，模拟了银屑病表皮增生过快的特点。而鼠尾鳞片表皮的角化缺少颗粒层形成的过程，模拟了银屑病表皮角化不全的特点。有人认为银屑病与机体免疫功能异常有关。我们采用上述二种动物模型试验了镇银膏对银屑病的治疗作用。结果表明，镇银膏高、中、低剂量对小鼠及大鼠阴道上皮细胞有丝分裂均有明显的抑制作用；高、中剂量对小鼠尾鳞片颗粒细胞层的形成有明显的促进作用，低剂量作用不明显与空白对照组比较无显著性差异。镇银膏也可明显提高小鼠外周血T淋巴细胞的活性并可非常显著的增强小鼠NK细胞杀伤靶细胞的活性。

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< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">一、试验目的

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">    通过动物模型实验，确证镇银膏对银屑病治疗的有效性，并了解产生疗效的剂量，为临床实验提供依据。

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">二、受试药物

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">    （一）名称：镇银膏

< 0cm 0cm 0pt">    （二）提供单位：山东淄川第二制药厂亓镇大夫。

< 0cm 0cm 0pt">    （三）编号或批号：  930918

< 0cm 0cm 0pt">    （四）含量、效价、制剂标示量，0.95g／ml。

< 0cm 0cm 0pt">    （五）溶剂：芝麻油

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">三、动物

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">    （一）来源、种属、品系、合格证

      1、小鼠：昆明纯系；BALB/C纯种，由山东医科大学实验动物中心提供。

      2、大鼠：wistar种   由山东医科大学实验动物中心提供

    （二）体重：

     昆明系小鼠为20～25g，  BALB/C 小鼠为18～22g。

     大鼠体重为200～250 g

    （三）性别：小鼠雌雄兼有，大鼠为雌性。

    （四）各组动物数：8～10只。

四、试验方法选择

     对雌激素期期阴道上皮细胞有丝分裂的影响。

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">五、试验主要步骤

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">   （一）有效量的确定

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">     高剂量为LD₅₀的1/6量

< 0cm 0cm 0pt">     中剂量为LD₅₀的1/12量

< 0cm 0cm 0pt">     低剂量为LD₅₀的1/24量

< 0cm 0cm 0pt; mso-outline-level: 1">   （二）镇银膏对雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响。

< 0cm 0cm 0pt">    1．对小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响。

< 0cm 0cm 0pt">   （1）试验方法：取昆明种小鼠60只，体重20～25g，雌性，随机分为6组，每只小鼠均背部剃毛约3cm²。第1组为空白对照组于背部剃毛处涂抹芝麻油0.05ml／10g；第2～4组为镇银膏高、中、低剂量组，于背部剃毛处分别涂抹0.1，0.05和0.025ml／10g，第5组为去炎松组，于背部剃毛处涂抹去炎松软膏0.0075mg／10g。均隔日给药1次，共7次，在给药第5次后，给每只小鼠ip乙烯雌酚，每次0.2mg，每日1次，连续注射3天。第6组为氨甲喋呤组于给乙烯雌酚3天后，给予ip氨甲碟呤0.1mg／10g，每天1次，共3次。为了避免细胞有丝分裂的日夜节律对数据的影响，最后1次给药统一规定在上午8时，上午9时ip秋水仙碱2mg／kg，使有丝分裂停止于M期的中期而便于计数。下午2时杀死小鼠，取阴道标本以10％福尔马林固定，石腊包埋，HE染色，用光学显微镜观察细胞有丝分裂，计数500个基底细胞中的有丝分裂数，折算出每100个基底细胞的有丝分裂数，称为有丝分裂指数。将实验组和对照组的有丝分裂指数作比较，进行统计学处理。

< 0cm 0cm 0pt">   （2）给药途径   皮肤

< 0cm 0cm 0pt">   （3）给药次数   隔日1次，共7次。

   （4）试验对照

        ①空白对照  芝麻油

        ②己知阳性药物对照及选择依据：去炎松软膏，为目前国内临床治疗银屑病的外用药物，故选此药为阳性对照药。氨甲喋呤，本药为银屑病动物模型实验中所用的阳性对照药故也选用此药，以证实试验方法的可靠性。

   （5）试验结果见表1

                表1 ： 镇银膏对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响

< 0cm 0cm 0pt 5.85pt">组         别	< 0cm 0cm 0pt">     动  物  数	< 0cm 0cm 0pt">阴道上皮细胞有丝分裂指数 < 0cm 0cm 0pt">      （x±s）
< 0cm 0cm 0pt">空白对照组 < 0cm 0cm 0pt">镇银膏高剂量组 < 0cm 0cm 0pt">镇银膏中剂量组 < 0cm 0cm 0pt">镇银膏低剂量组 < 0cm 0cm 0pt">去炎松软膏组 < 0cm 0cm 0pt">氨甲喋呤组	10       10      10      10      10      10	20.18±2.90   7.12±1.01   *** 11.94±2.07  *** 15.88±4.16  * 18.98±7.79   15.06±4.39  *

   与空白对照组比较大   * P＜0.05    ***  P＜0.001

    结果表明：镇银膏高、中剂量对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂均有非常显著的抑制作用（P＜0.001）低剂量与氨甲喋呤有显著的抑制作用（P＜0.05 ），去炎松软膏无显著作用。

    2．对大鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂的影响。

   （1）试验方法  取wistar雌性大鼠60只，体重200～250g，每只鼠背部剃毛约20cm²，随机分为6组，第1组为空白对照组，于背部剃毛处涂抹芝麻油0.4ml/100g，第2～4组为镇银膏高、中、低剂量组，分别于背部剃毛处涂抹0．8、0．4和0．2ml/100g，第5组为去炎松组，于背部剃毛处涂抹去炎松软膏0．5mg／100g，隔日1次，共7次，给药第5次后，给每只鼠ip乙烯雌酚，每次1mg每日1次，连续注射3天，第6组为氨甲喋呤组于给乙烯雌酚3天后ip氨甲喋呤1mg/kg。为了避免细胞有丝分裂的日夜节律对数据的影响，各组最后1次给药统一规定在上午8时，上午9时每只鼠ip秋水仙碱2mg／kg，使有丝分裂停止于M期的中期而便于计数。下午2时杀死大鼠，取阴道标本，以10％福尔马林固定，石腊包埋，HE染色，用光学显微镜观察细胞有丝分裂，计数500个基底细胞的有丝分裂数，折算出每100个基底细胞有丝分裂数，称为有丝分裂指数。将实验组与对照组的有丝分裂指数作比较，进行统计学处理。

   （2）给药途径  皮肤

   （3）给药次数  隔日1次，共7次。

   （4）试验对照

        ①空白对照   芝麻油

        ②已知阳性药物对照及选择依据同上述实验。

   （5）试验结果   见表2

           表2：镇银膏对大鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响

组     别	动  物  数	阴道上皮细胞有丝分裂指数 （x±s）
空白对照组 镇银膏高剂量组 镇银膏中剂量组 镇银膏低剂量组 去炎松软膏组 氨甲喋呤组	10 10 10 10 10 10	19.94±2.51   8.25±1.20   ** 9.36±2.34   ** 8.52±4.21   ** 17.78±5.23   13.17±1.59  **

   与空白对照组比较大   **  P＜0. 01

    结果表明，镇银膏高、中、低剂量及氨甲喋呤对大鼠阴道上皮细胞有丝分裂均有非常明显的抑制作用（P＜0.01），去炎松作用不明显与空白对照组比较无显著性差异。