银屑病患者血清中神经免疫蛋白与淋巴细胞转化的研究 中华皮肤科杂志 1998年第2期第31卷 论著 作者：杨雪琴 邵黎 那爱华 郭秀兰 庞晓文 李世荫 范少光 单位：100036 北京，空军总医院皮肤科(杨雪琴 那爱华 郭秀兰)； 北京医科大学生理学系(邵黎 范少光)；北京医科大学第三医院皮肤科(庞晓文 李世荫) 关键词：银屑病；神经免疫蛋白；淋巴细胞转化 【摘要】 目的 为了解紧张、压抑等心理因素诱发、加重银屑病的物质基础。方法 采用放射免疫法测定了49例银屑病患者和34例正常人血清对正常小鼠淋巴细胞转化的影响；以及用神经免疫蛋白(NIP)单克隆抗体中和银屑病患者血清，然后对正常小鼠淋巴细胞转化的抑制作用的试验。 结果 银屑病患者血清对正常小鼠淋巴细胞的转化率为41.55%，正常人血清对正常小鼠淋巴细胞的转化率为68.09%，表明银屑病患者血清中有抑制正常小鼠淋巴细胞转化的物质，进行期患者血清中的抑制作用大于静止期，即皮损面积愈大者其血清对小鼠淋巴细胞转化率的抑制作用愈强(P＜0.01，r=0.4939)。 结论 银屑病患者血清中存在抑制淋巴细胞转化的物质，通过NIP单克隆抗体中和试验证明此物质与NIP相同或类似，但NIP与银屑病发生和发展的因果关系有待进一步研究。 我们曾运用诱发性规范化序列的心率变异性研究银屑病患者的植物神经功能，结果表明银屑病患者的副交感和交感神经功能均明显低于正常对照者［1］。范少光教授等［2］通过对大鼠或小鼠束缚应激试验发现其血清中能产生一种应激免疫抑制蛋白(又称神经免疫蛋白，neuro immune protein, NIP)。NIP是在中枢神经系统控制下由外周淋巴组织产生的一种调节蛋白，释放入血，具有抑制淋巴细胞转化及其它免疫抑制作用［3，4］。最近的研究发现运动员大运动量训练后血清中也产生NIP［5］。为探讨银屑病患者因心理因素加重和诱发的物质基础，以及银屑病发病的神经免疫机理，我们对银屑病患者和正常人血清中NIP进行了研究，现将结果报道如下。 资料和方法 (一)临床资料：寻常型银屑病患者49例，其中男31例，女18例；年龄14～72岁，平均38.2岁；皮损面积占体表面积的百分比：≤5% 10例，6%～20% 19例，＞20% 20例。进行期28例，静止期21例。49例患者中曾在院外肌注皮质类固醇激素(简称激素)及免疫抑制剂甲氨喋呤(MTX)者8例，曾服用制银灵(复方氨肽素)11例，迪银片2例，中药10例，采用生物反馈治疗2例，单纯外用激素9例，大力士软膏2例，未经任何治疗者5例。试验前一周均无药物治疗。正常对照组34例，为北京医科大学及空军总医院无明显疾病的工作人员，男26例，女8例，年龄22～63岁，平均34.5岁。 (二)实验室工作：本实验工作在北京医科大学生理学系神经免疫调节研究室完成。 1.实验动物：BALB/c雄性小鼠，鼠龄4～6周，体重20～25g，由北京医科大学实验动物科学中心提供。 2.实验药品：RPMI1640细胞培养液(Gibco公司)；刀豆蛋白A(ConA, Sigma公司产品)；３H-TdR(３H-胸腺嘧啶核苷，由北京原子能技术研究所生产)。 3.实验方法： (1)人血清制备：取肘静脉血，4℃ 4～6小时凝固后，室温2300g离心30分钟，取血清。-30℃贮存备用(贮存时间不超过60天)。 (2)血清对正常小鼠淋巴细胞转化的影响：正常淋巴细胞来自正常小鼠肠系膜周围淋巴结。取正常人或银屑病患者血清1.56μl加入总体积为200μl/孔的淋巴细胞液中(淋巴细胞的浓度为1.5×10６个/ml，ConA浓度为4μg/ml)，每份血清标本设三复孔。含血清淋巴细胞在37℃、5% CO２、95%空气孵育箱中培养24小时，加入３H-TdR 7.6kBg/孔，继续培养6小时。用多头细胞收集器将细胞收集在玻璃纤维滤纸上。以β液体闪烁仪测定每分钟的计数(c/min值)。以无血清的淋巴细胞转化的c/min值为100%，计算有血清的淋巴细胞转化率。 (3)NIP单克隆抗体对抗银屑病患者血清的抑制：随机取20例正常人血清各4μl并混匀，随机取20例银屑病患者血清各4μl并混匀，从上述正常人或银屑病患者混合血清中各取1.56μl，加NIP单抗0.18μg，用RPMI 1640稀释至100μl/孔的终体积。置37℃、5% CO２、95%空气的孵育箱孵育2小时，再加入正常淋巴细胞悬液(2×10６个/ml～1.5×10６个/ml)，总体积每孔为200μl，观察NIP单克隆抗体的作用(淋巴细胞转化的条件同上)。 结 果 (一)银屑病患者血清对淋巴细胞转化的影响：以不加任何血清时的正常小鼠淋巴细胞转化值为标准(100%)来分析正常人及银屑病患者血清对正常小鼠淋巴细胞转化的影响。 1.49例银屑病患者血清的稀释度为1∶128时淋巴细胞转化率为41.55±27.07%(±s，下同)，而34例健康对照者的血清稀释度为1∶128时淋巴细胞转化率为68.09±28.02%，两组经t检验，t=4.33，P＜0.01，有高度显著性差异。说明银屑病患者血清具有抑制正常小鼠淋巴细胞转化的物质。 2.49例银屑病患者中进行期28例，静止期21例，患者血清稀释度为1∶128，静止期淋巴细胞转化率为47.90±28.88%，进行期淋巴细胞转化率为36.78±25.11%，提示进行期银屑病患者血清中抑制淋巴细胞转化的作用大于静止期，静止期大于健康对照组对淋巴细胞的转化作用，经方差分析，F=9.39，P＜0.01。 3.49例银屑病患者根据皮损面积大小分成三组，即小于体表面积5%者10例，6%～20%者19例，大于20%者20例，其三组患者血清稀释度均为1∶128时正常小鼠淋巴细胞转化率分别为58.90±27.72%，41.37±27.38%及33.05±28.58%。表明不同面积组均低于健康对照组，并提示银屑病患者皮损面积愈大其血清对小鼠淋巴细胞转化率的抑制作用愈强。经方差分析，F=8.643，P＜0.01，其相关系数r=-0.4939，P＜0.01。 4.银屑病患者的病程、性别和年龄对正常小鼠淋巴细胞转化率的抑制作用均无影响。 (二)NIP单克隆抗体对银屑病患者血清抑制正常小鼠淋巴细胞转化的影响：以正常人血清对正常小鼠淋巴细胞转化率为标准分析(100%)，银屑病患者血清中未加NIP单克隆抗体时对正常小鼠淋巴细胞转化率为28%，而加入NIP单克隆抗体后，其转化率为87%，其翻转率为59%，说明银屑病患者血清中抑制淋巴细胞转化的主要物质与NIP有相同的抗原决定簇。 讨 论 精神紧张和过度劳累是银屑病发病或加重的重要因素。1991年Farber等［6］提出银屑病发病的精神神经免疫机理，认为紧张的生活事件可影响神经、内分泌和免疫系统。银屑病患者有明显的免疫功能异常，免疫学方面研究较为一致的结果是细胞免疫功能低下，外周血淋巴细胞转化率、自然花瓣形成率及迟发性皮肤过敏试验等反应均低下［7］。本文研究结果发现银屑病患者血清对正常小鼠淋巴细胞转化的抑制作用明显强于健康人对照组，进行期更为明显。进一步的分析表明淋巴细胞转化率降低与皮损面积有正相关关系，即皮损面积愈大淋巴细胞转化率愈低。采用NIP单克隆抗体中和试验研究表明银屑病患者血清的抑制作用可部分被NIP单克隆抗体所对抗，说明银屑病患者血清中存在的抑制淋巴细胞转化的物质与NIP可能是同一类物质。至于银屑病患者血清中此物质的产生部位及其临床意义，我们将设计实验进一步研究。 本研究尽管发现银屑病患者血清中存在一种能抑制淋巴细胞转化的物质，并证明它可能是与NIP相同的或类似的物质，但NIP与银屑病之间的关系是平行关系，还是因果关系，还有待进一步的研究。 参 考 文 献 1 杨雪琴, 李铀, 王毅侠, 等. 银屑病患者的心率变异性研究. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶115-117. 2 Zha HB, Ding GF, Fan SG. Serum factor(s) indu ced by restraint stress in mice and md rat suppresses lymphocyte proliferation. Brain Behavior Immunity, 1992,6∶18-31. 3 刘薇, 邓玉兰, 李怡凡, 等. 束缚应激血清抑制因子对免疫细胞功能的影响. 北京医科大学学报, 1995,27∶150. 4 李怡凡, 左永昌, 邵黎, 等. 脑室注射白细胞介素1对淋巴细胞应激免疫抑制因子生成的影响. 药学学报, 1995,30∶395-399. 5 邵黎, 矫伟, 朱晓松, 等. 运动员剧烈运动后血中应激免疫抑制蛋白的产生. 中国应用生理学杂志, 1997,13∶312-315. 6 Farber EM, Reing, Lanigan SW, Stress and psoriasis, psychoneuroimmunologic mechanism. Int J Dermatol, 1991,30∶8-12. 7 刘承煌. 银屑病的临床和研究. 上海: 上海科学技术文献出版社, 1994.43-59 |
